
A Separação da Luz da Escuridão é, do ponto de vista da cronologia gênesis, o primeiro dos nove painéis centrais que correm ao longo do centro do teto da Capela Sistina de Michelangelo e que retratam cenas do Livro de Gênesis. Michelangelo provavelmente completou este painel no verão de 1512, o último ano do projeto do teto sistino. É uma das cinco cenas menores que alternam com quatro cenas maiores que correm ao longo do centro do teto sistino. A Separação da Luz das Trevas é baseada em versos 3-5 do primeiro capítulo do Livro de Gênesis:
3E Deus disse: "Que haja luz", e havia luz.
4God viu que a luz era boa, e Ele separou a luz da escuridão.
5God chamou a luz de "dia", e a escuridão que ele chamou de "noite". E havia noite, e havia manhã, o primeiro dia. Embora em termos da cronologia gênesis seja o primeiro de nove painéis centrais ao longo do teto sistino, a Separação da Luz da Escuridão foi o último dos nove painéis pintados por Michelangelo. Michelangelo pintou o teto sistino em dois estágios. Entre maio de 1508 e o verão de 1511, ele completou a "metade de entrada" da capela sistina e terminou esta etapa pintando a Criação de Eva e as cenas flanqueando este painel central. Após um período ocioso de cerca de 6 meses, ele pintou a "metade do altar", começando pela Criação de Adão, entre o inverno de 1511 e outubro de 1512.
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